CytoFLEX nano精準(zhǔn)量化負(fù)載效率，為神經(jīng)退行性疾病治療提供關(guān)鍵證據(jù)

—— 貝克曼庫爾特（Beckman?Coulter）CytoFLEX nano 在工程化細(xì)胞外囊泡負(fù)載效率分析中的應(yīng)用

CytoFLEX nano 納米流式分析平臺(tái)由貝克曼庫爾特（Beckman?Coulter）推出，適用于納米級(jí)小顆粒及細(xì)胞外囊泡樣本的流式分析。本研究中，該平臺(tái)被用于細(xì)胞外囊泡負(fù)載效率的定量評(píng)估。

研究背景

帕金森?。?/span>PD）是全球第二大神經(jīng)退行性疾病，其主要病理特征包括多巴胺能神經(jīng)元丟失、α?突觸核蛋白（α?Syn）異常聚集、溶酶體功能障礙以及線粒體損傷。姜黃素具有一定的神經(jīng)保護(hù)潛力，但受限于生物利用度低、體內(nèi)清除快以及血腦屏障穿透能力有限，其臨床應(yīng)用受到明顯制約。

因此，如何實(shí)現(xiàn)姜黃素在腦內(nèi)，尤其是多巴胺能神經(jīng)元中的有效遞送，是當(dāng)前帕金森病相關(guān)研究中的關(guān)鍵科學(xué)問題。

研究創(chuàng)新：工程化靶向細(xì)胞外囊泡遞送系統(tǒng)

中國(guó)醫(yī)科大學(xué)等機(jī)構(gòu)的研究團(tuán)隊(duì)構(gòu)建了一種基于工程化細(xì)胞外囊泡（extracellular vesicles, EVs）的靶向遞送系統(tǒng)。研究人員通過對(duì) HEK293T 細(xì)胞進(jìn)行基因工程改造，使其分泌的 EV 表面表達(dá)靶向多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)體（DAT）的單鏈抗體片段（scFv），從而賦予 EV 對(duì)多巴胺能神經(jīng)元的靶向能力。

在此基礎(chǔ)上，研究團(tuán)隊(duì)將姜黃素負(fù)載至上述靶向 EV 中，構(gòu)建了 Cur@αDAT EVs 遞送體系。相關(guān)研究成果發(fā)表于 Journal of Nanobiotechnology。

圖1｜工程化 Cur@αDAT EVs 的構(gòu)建思路及其在帕金森病研究中的應(yīng)用示意

CytoFLEX nano：用于EV負(fù)載效率定量分析的工具（貝克曼庫爾特 Beckman?Coulter）

在對(duì)該遞送系統(tǒng)進(jìn)行表征時(shí)，研究團(tuán)隊(duì)需要回答一個(gè)關(guān)鍵問題：在制備得到的 EV 群體中，有多少 EV 實(shí)際成功負(fù)載了姜黃素？

為此，研究人員采用了貝克曼庫爾特（Beckman?Coulter）CytoFLEX nano 納米流式分析儀對(duì) EV 樣本進(jìn)行分析。通過對(duì)熒光信號(hào)進(jìn)行定量統(tǒng)計(jì)，研究團(tuán)隊(duì)得以評(píng)估姜黃素在 αDAT EVs 中的負(fù)載比例。

CytoFLEX nano 的分析結(jié)果顯示，約 88.3% 的 αDAT EVs 成功負(fù)載了姜黃素（圖2F）。該結(jié)果為后續(xù)體內(nèi)外功能實(shí)驗(yàn)提供了明確的定量基礎(chǔ)。

圖2｜αDAT?EV 的表征及負(fù)載效率分析（其中 F 為基于貝克曼庫爾特 CytoFLEX nano 的納米流式分析結(jié)果）
（A）αDAT scFv?CD63 融合構(gòu)建體示意
（B）SPR 分析 αDAT?EV 與重組人 DAT 蛋白的結(jié)合
（C）Western blot 分析 EV 標(biāo)志物
（D–E）姜黃素包封與包封效率分析
（F）CytoFLEX nano 對(duì)負(fù)載姜黃素 EV 的定量分析
（G–J）熒光顯微、TEM 及 NTA 分析結(jié)果

技術(shù)說明｜貝克曼庫爾特（Beckman?Coulter）CytoFLEX nano

CytoFLEX nano 是一款納米級(jí)流式細(xì)胞分析系統(tǒng)，可用于對(duì)小顆粒樣本進(jìn)行多參數(shù)檢測(cè)。在本研究中，該平臺(tái)被用于區(qū)分并定量分析負(fù)載與未負(fù)載姜黃素的細(xì)胞外囊泡群體。

研究核心發(fā)現(xiàn)

01 體外神經(jīng)保護(hù)作用

在 6?羥基多巴胺（6?OHDA）誘導(dǎo)的帕金森病細(xì)胞模型中，Cur@αDAT EVs 處理可降低活性氧（ROS）和丙二醛（MDA）水平，減少 α?Syn 聚集，并上調(diào) PARKIN、TH 和 DJ?1 等相關(guān)蛋白的表達(dá)。

02 自噬?溶酶體通路調(diào)控

Cur@αDAT EVs 處理可抑制 AKT?mTOR 信號(hào)通路，促進(jìn)轉(zhuǎn)錄因子 EB（TFEB）核轉(zhuǎn)位，從而增強(qiáng)自噬?溶酶體通路功能。實(shí)驗(yàn)中觀察到具有酸性溶酶體的細(xì)胞比例明顯上升。

03 線粒體功能改善

處理后細(xì)胞的線粒體含量與膜電位增加，并伴隨線粒體轉(zhuǎn)錄因子 A（TFAM）表達(dá)上調(diào)，提示線粒體功能得到改善。

04 體內(nèi)分布及行為學(xué)變化

在 6?OHDA 誘導(dǎo)的帕金森病大鼠模型中，αDAT EVs 在腦組織中呈現(xiàn)較高富集，并在一定時(shí)間內(nèi)保持可檢測(cè)水平。Cur@αDAT EVs 處理后，大鼠的部分運(yùn)動(dòng)與行為學(xué)指標(biāo)得到改善

圖3｜Cur@αDAT EVs 在 PD 大鼠模型中的體內(nèi)分布及行為學(xué)評(píng)估結(jié)果

05 神經(jīng)免疫微環(huán)境調(diào)節(jié)

Cur@αDAT EVs 處理促進(jìn)小膠質(zhì)細(xì)胞表型變化，并影響星形膠質(zhì)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)提高多種神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的表達(dá)水平。

圖4｜Cur@αDAT EVs 在 PD 模型中的組織學(xué)與免疫學(xué)評(píng)估結(jié)果

結(jié)論

本研究成功開發(fā)了一種基于工程化細(xì)胞外囊泡的靶向遞送系統(tǒng)，通過表面展示抗DAT單鏈抗體，實(shí)現(xiàn)了姜黃素向多巴胺能神經(jīng)元的精準(zhǔn)遞送。Cur@αDAT EVs通過激活自噬-溶酶體通路、改善線粒體功能、調(diào)節(jié)神經(jīng)免疫微環(huán)境，在帕金森病細(xì)胞和動(dòng)物模型中展現(xiàn)出顯著的治療效果。

研究過程中，貝克曼庫爾特（Beckman?Coulter）CytoFLEX nano 納米流式分析平臺(tái)對(duì)研究中EV負(fù)載效率的精準(zhǔn)量化，結(jié)合對(duì)線粒體功能、免疫細(xì)胞極化的系統(tǒng)分析，先進(jìn)的分析工具貫穿了整個(gè)研究的證據(jù)鏈，為這一創(chuàng)新治療策略的可靠性提供了堅(jiān)實(shí)支撐。本研究不僅為帕金森病治療提供了新策略，也為難溶性藥物的靶向遞送提供了可借鑒的方法學(xué)參考。

平臺(tái)信息｜貝克曼庫爾特（Beckman?Coulter）CytoFLEX nano

Ø       清晰分辨40nm-1μm粒徑的小顆粒樣本

Ø       配備4激光12通道，全方位滿足實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)靈活性需求

Ø       內(nèi)置靈敏度監(jiān)測(cè)，樣品體積監(jiān)測(cè)和Baseline監(jiān)控，確保實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性、可靠性和可重復(fù)性

參考文獻(xiàn)
Shie, M.Y., Chen, M.C., Chen, Y. et?al. Engineered extracellular vesicles?mediated curcumin delivery in brain microenvironment modulating lysosomes, mitochondria, and microglia reprogram for parkinson’s disease therapy. J Nanobiotechnol 24, 46 (2026).

#神經(jīng)退行性#帕金森#納米流式分析儀#CytoFLEX nano